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如何在培養基平皿中添加酶才能消除抗生素的殘留,目前主要依據:《藥典》2015年版三部附錄1105表2:“常見干擾物的中和劑或滅活方法”中所對應的中和或滅活方法,然后根據抗生素生產企業的實際情況,收集在其生產環境中抗生素粉塵的量,后做加酶實驗得出終的加酶量。為了保證加酶的均勻度,如TSA、SDA等培養基必須在液體固化前的低溫度時加入生物酶,而且要持續勻速攪拌,使酶與培養基充分混合均勻,再灌裝于空培養基皿內,這就注定了加酶的培養基平皿制作必須是一個工業化的生產過程。當然確認每塊平皿中加多少活性單位的酶量,是必須通過驗證才可以得出的數據。
在藥微生物檢驗過程中經常會碰到一些“疑難雜癥”如:如何避免菌落成片?1、培養基傾注時溫度不宜過高,可減少傾注后培養皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延,或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽;2、細菌計數時,在每100ml營養瓊脂培養基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml,可使生成的菌落變紅色,容易點計,也可在一定程度上抑制菌落漫延。
培養基里的凝固物質常用的是凝固物質為瓊脂,特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。瓊脂是從石花菜中提取出來的一種多糖,在45℃以下則凝固成凝膠狀態,是一種理想的固體培養基賦形劑。因其不被細菌分解利用,故無營養作用。還分為指示劑。在制備培養基時加入一定種類的抑制,目的在于抑制非檢出菌(非目的菌)的生長,以利于檢出菌(目的菌)的生長。指示劑在培養基中加入一定種類的指示劑,是為了便于觀察細菌是否利用和分解培養基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴香草酚藍、藍等酸堿指示劑。亞甲藍常用作氧化還原指示劑。
接觸碟法:是將充滿規定的瓊脂培養基的接觸碟對規則表面或平面進行取樣,然后置合適的溫度下培養一定時間并計數。擦拭法是接觸碟法的補充,用于不規則表面的微生物監測,特別是設備的不規則表面。擦拭法的擦拭面積應采用合適的無菌模板或標準尺確定,取樣后,將拭子置合適的緩沖液或培養基中,充分震蕩,然后采用合適的方法技術。
張家港R2A瓊脂培養基平皿廠家微生物常用培養基的用途:1.巧克力瓊脂:供分離奈瑟氏菌、流感嗜血用2.哥倫比亞瓊脂:供分離營養要求較高的病原菌用3.伊紅-美蘭瓊脂:用于腸道致病菌的分離培養4.哪里有R2A瓊脂培養基平皿廠家麥康凱瓊脂:選擇分離腸道致病菌和腸球菌5.我國蘭瓊脂:弱選擇性培養基、選擇分離腸道致病菌6.慶大素瓊脂:供糞便中分離弧菌及Elitor弧菌用7.改良沙保羅瓊脂:供真菌及酵母樣菌分離培養8.玉米吐溫80瓊脂:觀察厚膜孢子及假菌絲9.CDC厭氧血瓊脂:用于營養要求較高的厭氧菌的培養10.嗜血菌瓊脂:用于嗜血菌分離培養用11.玉米吐溫80瓊脂:觀察厚膜孢子及假菌絲12.M-H瓊脂:普通細菌藥敏試驗13.HTM瓊脂:嗜血菌奈瑟氏藥敏專用14.營養瓊脂:細菌培養用15.麥康凱瓊脂:腸道致病菌和腸道菌的選擇性分離培養16.我國蘭瓊脂:弱選擇性培養基、選擇分離腸道致病菌
培養基里的無機鹽類提供細菌生長的各種元素,如:鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。用于制備培養基的無機鹽類有多種,其中常用的有氯化鈉和磷酸鹽,前者對維持酶的活性、調節菌體內外的滲透壓非常重要,后者是細菌良好的磷源,并在培養基中具有緩沖作用。生長因子是細菌生長所必需的,但需要量很小。在制備培養基時,常加入、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長因子。血液中可提供輔酶(如V因子)、血紅素(X因子)等特殊生長因子,所以,在培養基中加入血液可用于培養營養要求較高的細菌。